一.色譜柱
色譜柱是色譜儀的重要組成部分，它是裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。可分為填充柱和開管柱兩大類，液相色譜通常均采用填充柱。
二．延長(zhǎng)壽命措施
通常一根色譜柱在分析數(shù)千個(gè)樣品之后性能仍然保持良好，但也有的色譜柱僅分析不多的樣品后幾乎就報(bào)廢了。影響色譜柱壽命的因素很多。例如樣品的組分、純度等。在色譜柱的使用過程中，我們可以采取一些措施來減少色譜柱的故障，達(dá)到延長(zhǎng)壽命的目的。
1.避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。高壓突然沖擊主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)、泵起動(dòng)快、柱切換操作等引起的。在轉(zhuǎn)動(dòng)六通進(jìn)樣閥時(shí)從泵到柱的液流會(huì)瞬時(shí)切斷，在閥的泵側(cè)壓力升高，閥的柱側(cè)壓力降低(變化超過20%)，閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常。手動(dòng)進(jìn)樣閥的變化不大，自動(dòng)進(jìn)樣閥比較慢，可能造成壓力沖擊
可用氦氣代替空氣驅(qū)動(dòng)進(jìn)樣閥。因?yàn)榈獕嚎s系數(shù)小。
另外泵起動(dòng)不應(yīng)過快，可分步操作。如用3mL/min流速，先從lmL/min到2mL/min，然后再3mL/min，每個(gè)間隔應(yīng)大于20s。
2.注意分離條件
多數(shù)色譜柱有很寬的試驗(yàn)條件范圍，但具體應(yīng)用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動(dòng)相的選擇。
硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求PH在2.5～7之間。
極端pH的流動(dòng)相能溶解硅膠，使鍵合相流失，非堿性組分的保留不斷減少，堿性組分的保留增加，引起堿性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動(dòng)相，可加預(yù)柱(飽和柱)。預(yù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動(dòng)相，減少了分析柱填料的損失。預(yù)柱不要求柱效高，用價(jià)格低的一般硅膠疏松地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用預(yù)柱也有不利的影響，即新流動(dòng)相難以平衡，保留時(shí)間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了預(yù)柱一定要加流路過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。
以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后，會(huì)增加對(duì)流動(dòng)相中化學(xué)物質(zhì)的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。在40℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，會(huì)使值降低50%。
3.增加流路過濾器和保護(hù)柱
流路過濾器緊靠進(jìn)樣閥后面，位于分析柱前。0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒入柱。因?yàn)槊總�(gè)樣品都過濾既費(fèi)事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。
也可以在流路加上保護(hù)柱，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器。保護(hù)柱的使命是收集阻塞色譜柱進(jìn)口的來自樣品的化學(xué)垃圾，這種垃圾最終降低柱效能。
保護(hù)柱是消耗品，分析50～100個(gè)比較臟的樣品之后就要調(diào)換新的。保護(hù)柱應(yīng)該是小體積，用分析柱的同種填料填裝。將保護(hù)柱和流路過濾器連在一個(gè)單元內(nèi)，使用起來非常方便。自己填裝保護(hù)柱都是用短柱、不超過3cm長(zhǎng)，內(nèi)徑2～3mm，用較大粒度的填粒(15～20μm)干法填裝，會(huì)使分析柱效略微有所降低。
4.用強(qiáng)溶劑定期沖洗色譜柱
每次工作結(jié)束，用強(qiáng)溶劑沖洗柱是良好的習(xí)慣�？捎眉状肌⒁译鏇_反相柱，沖去留在柱上的強(qiáng)吸附組分。用甲醇水為流動(dòng)相時(shí)也應(yīng)沖洗。
5.凈化樣品
用溶劑溶解的樣品，多數(shù)組分在一定的時(shí)間內(nèi)能完全從柱中流出來，不會(huì)造成危害。有些樣品可能含有微粒物質(zhì)，樣品中的某種組分(如蛋白質(zhì))在柱頭上沉積下來，組分在固定相上保留很強(qiáng)，溶劑帶走柱填料等，這些都會(huì)造成柱效能下降或?qū)χ鶋勖挠绊�，有必要采取措施防止柱變壞。如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色，進(jìn)樣前必須要過濾。
雖然流路上裝有過濾器和保護(hù)柱，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會(huì)使過濾器和保護(hù)柱超載，很快阻塞，或者微粒進(jìn)入分析柱，所以在進(jìn)樣前必須過濾樣品。若懷疑樣品與流動(dòng)相混合有沉淀而對(duì)色譜柱有阻塞，應(yīng)先試驗(yàn)一下，看樣品溶液加入流動(dòng)相中有無變渾或乳白色出現(xiàn)。如果進(jìn)樣后壓力突然增加而后又慢慢減小，表明樣品中有微�；虬l(fā)生沉淀。如有沉淀要設(shè)法改變分離條件，包括換樣品溶劑和流動(dòng)相或處理樣品去掉不溶物質(zhì)。應(yīng)盡量用小體積的樣品。有些樣品能很強(qiáng)地吸附在柱填料上，這樣會(huì)降低塔板數(shù)，改變樣品的保留物質(zhì)外，還要加保護(hù)柱，定期清洗色譜柱。有時(shí)因?yàn)槭韬觯脤?duì)柱有害的溶劑溶解樣品，比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進(jìn)50～100μL到硅膠基質(zhì)柱中，硅膠就很快溶解而使柱報(bào)廢。在這種情況下，應(yīng)立即中和樣品，或除去原溶劑中的有害成分。
6.其它措施
（1）認(rèn)真閱讀色譜柱使用說明書
（2）使用填充良好的色譜柱
（3）用穩(wěn)定的固定相。
（4）流動(dòng)相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意用95：5的水及有機(jī)溶劑過濾，有機(jī)溶劑不能低于5%。（5）貯存時(shí)，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機(jī)溶劑流動(dòng)相保存。
